Practica de laboratorio Nº 2

UNIDAD DE COMPETENCIA CONTROL DE PROCESOS EN LA INDUSTRIA DE LOS GRANOS Y DERIVADOS

AISLAMIENTO DE HONGOS PRODUCTORES DE MICOTOXINAS.

Introducción

La gran mayoría de productos agrícolas son invadidos por diversos de microorganismos durante su desarrollo en campo en campo, siendo los hongos los más abundantes, ocasionando severas pérdidas económicas al reducir el potencial de producción. Los granos y las semillas son invadidos por hongos en campo principalmente por los géneros Alternaria, Caldosporium, Helminstoporium, y Fusarium, entre otros, los cuales requieren de elevado contenido de humedad para desarrollarse (20-21%). Además, los cereales pueden contaminarse durante el almacén, siendo los géneros Aspergillus y penicillium, los que sobresalen, requiriendo la rehidratación del grano.

Para el aislamiento de los diferentes géneros de hongos, se requieren medios específicos que inhiban el crecimiento excesivo de hongos, tales como agar rosa de bengala-cloranfenicol RBC (Aspergillus y Penicillium) y medio de Nash Snyder (Fusarium). Las técnicas de mayor utilidad en el aislamiento de los hongos son; dilución en placa y siembra directa, ambas permiten el crecimiento del hongo para su posterior identificación, la cual se realiza en medios selectivos como son el medio Czapek para especies de Aspergillus y el agar hojas de clavel para especies de Fusarium.

Objetivo

El alumno realizará el aislamiento de hongos productores de micotoxinas a partir de granos destinados al consumo humano, mediante técnicas de Siembra Directa y Dilución en Placa.

METODOLOGÍA

Siembra directa de granos;

1.- Se obtendrá una muestra representativa de un lote de granos, a partir de la cual se obtendrá una submuestras representativa.

2.- Se procederá a realizar la técnica de Siembra Directa para granos, la cual consiste en:

3.- Se seleccionaran 100 granos al azar y se distribuirán en vasos de precipitado para la desinfección y lavado.

4.-  Se desinfectan con hipoclorito de sodio al 1% por 4 minutos.

5.- Se realiza un lavado por triplicado con agua esteríl.

6.- Se estilan los granos sobre filtro esteril.

7.- Los granos se colocarán (siembra) en medio selectivo para hongos (medio DRBC) o medio de cultivo general (Nash Snyder).

8.- Se dejan en incubación durante 7 días a 25 ºC.

Dilución en placa;

1.- A partir de una muestra representativa se pesarán 10 g y se mezclarán con 90 ml de agua peptonada estéril (0.1%) a alta velocidad durante 1 minuto (dilución 1:10).

2.- Se prepararán 4 diluciones (1:10) en tubos de ensayo y se aplicarán 0.1 mL a cajas de petri con medio DRBC.

3.- Se procederá a incubar durante 7 días a 25%.

Resultados

Alimento evaluado;________________________________________________

% de infección de granos;___________________________________________

Unidades formadoras de colonia (UFC);_______________________________

Describa las características macroscópicas de lãs colônias aisladas por dilución en placa.

Color;

Textura;

Discusión;

Conclusión;